Патент №2109816 - Рекомбинантный полипептид, способ ингибирования агрегации тромбоцитов, рекомбинантная плазмидная днк (варианты), рекомбинантный штамм e.coli (варианты), способ получения полипептида

Изобретение относится к биотехнологии и позволяет получить рекомбинантный полипептид, ингибирующий слипание и агрегацию тромбоцитов при воздействии таких условий, при которых проявляются церебровескулярные расстройства и сердечно-сосудистые расстройства. Рекомбинантный полипептид содержит область связывания GPIb фактора фон Виллебранда человека и имеет определенную аминокислотную последовательность. Способ ингибирования агрегации тромбоцитов осуществляют путем контактирования тромбоцитов с эффективным количеством рекомбинантного полипептида. Для экспрессии рекомбинантного полипептида используют рекомбинантную плазмидную ДНК pvWF-VC3 или pvWF-VCL. Каждая из ДНК содержит область связывания гликопротеина Ib фактора фон Виллебранда человека. Эта область включает фрагмент ДНК, кодирующий аминокислотную последовательность полипептида, и содержит промоторную систему deo P1P2 или промотор Pl фага ламбда, deo - сайт связывания рибосом, T1T2-терминатор транскрипции и ген устойчивости к ампициллину Amp2 в качестве генетического маркера. Продуцентами полипептида являются рекомбинантный штамм E coli/pvWF-VC3 или IpvWF-VCL. При получении полипептида трансформируют штамм E coli рекомбинантной плазмидной ДНК, проводят отбор и культивирование трансформантов в условиях, обеспечивающих накопление полипептида. При выделении биологически активного пептида разрушают бактериальные клетки с выделением лизата. Из лизата выделяют тельца включения с помощью денатурирующего агента или гуанидингидрохлорида, или мочевины с последующей очисткой раствора полипептида катионнообменной хроматографией. Растворенный полипептид обрабатывают дисульфидом или глутатионом, или тиоредоксином, или бета-меркаптоэтанолом, или цистеином. Полученный полипептид обрабатывают диализом, а диализат -катионно-обменной хроматографией. 7 с.п.ф-лы, 4 табл., 27 ил.

Патент №2109816, изображение 1
Патент №2109816, изображение 2
Патент №2109816, изображение 3

Классификация патента

Код Наименование
МПК C12N 1/00Микроорганизмы, например простейшие; их композиции; способы размножения, содержания или консервирования микроорганизмов или их композиций; способы приготовления или выделения композиций, содержащих микроорганизмы; питательные среды
МПК C12N 15/00Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев
МПК C12P 21/00Получение пептидов или протеинов