Патент №2233334 - Способ встраивания нужной днк в геном клетки млекопитающего и векторная система для его осуществления

Изобретение относится к области генной инженерии и может быть использовано в биотехнологической промышленности. Предложен способ интеграции интересующей ДНК в сайт генома клетки млекопитающего, характеризующийся высокой транскрипционной активностью. Указанный сайт предварительно маркируют путем введения в клетку специально сконструированной плазмиды (“маркерной”), включающей а) фрагмент гетерологичной по отношению к геному клетки ДНК, которая после интеграции в геном дает уникальный сайт для гомологичной рекомбинации; б) фрагмент ДНК, кодирующий часть первого селективного маркера и в) по крайней мере одну маркерную последовательность ДНК, обеспечивающую возможность отбора клеток, в которых успешно прошла интеграция “маркерной” плазмиды. Отобранные на первой стадии клетки затем трансформируют второй (“целевой”) плазмидой, включающей (а) фрагмент ДНК, обладающий достаточной для осуществления рекомбинации гомологией с уникальным сайтом а) “маркерной” плазмиды; б) фрагмент ДНК, кодирующий вторую часть первого селективного маркера, совместная экспрессия которого с элементом (б) “маркерной” плазмиды обеспечивает синтез полного маркерного белка и в) ДНК, которую предполагается встроить в геном. Путем скрининга на экспрессию первого селективного маркера отбирают клетки, в которых ДНК “целевой” плазмиды и соответственно “нужная” ДНК, включилась в состав геномной ДНК. Предложен набор для осуществления способа, содержащий по крайней мере “маркерную” и “целевую” плазмиды. Применение изобретения обеспечивает высокий уровень экспрессии при получении любых рекомбинантных белков. 2 с. и 39 з.п. ф-лы, 10 ил., 5 табл.

Патент №2233334, изображение 1
Патент №2233334, изображение 2
Патент №2233334, изображение 3

Классификация патента

Код Наименование
МПК C12N 15/00Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев