Патент №2408728 - Способ получения иммуногенного рекомбинантного экстраклеточного фрагмента коннексина-43

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения иммуногенного рекомбинантного экстраклеточного фрагмента коннексина-43. Изобретение может найти применение в методологии создания биологически активных антител, связывающихся с живой клеткой, адресной доставки лекарственных препаратов к клеткам-мишеням. Предложенный способ включает клонирование второй экстраклеточной петли Е2 Сх43, представляющей собой фрагмент коннексина-43 Q173-1208 с аминокислотной последовательностью QWYIYGFSLSAVYTCKRDPCPHQVDCFLSRPTEKTI, в два плазмидных вектора pCBDQ и pHPMLQ. После чего осуществляют трансформацию полученными плазмидными ДНК клеток E.coli. Затем проводят культивирование трансформированных клеток до оптической плотности 0,7-0,9. Далее осуществляют индукцию экспрессии плазмиды 0,9-1,1 мМ изопропилтиогалактозидом. После чего проводят наработку рекомбинантных белков слияния и их выделение в присутствии 7,9-8,1 М мочевины методом хроматографии на Ni-NTA агарозе. Предложенное изобретение позволяет разработать способ получения иммуногенного рекомбинантного экстраклеточного фрагмента коннексина-43 крысы в составе высокоиммуногенного химерного белка, пригодного для создания моноклональных антител. 2 ил., 1 табл.