Патент №2425881 - Рекомбинантная бактерийная плазмида, экспрессирующая белок патогена и биологически активный фрагмент орнитиндекарбоксилазы в клетках млекопитающих, предназначенная для разработки средств профилактики вирусных инфекционных заболеваний (на примере вируса клещевого энцефалита)

Изобретение относится к биотехнологии, иммунологии и молекулярной биологии. Предложенный способ модификации ДНК-вакцинного препарата основан на слиянии гена неструктурного белка NS 1 ВКЭ с фрагментом гена белка орнитиндекарбоксилазы мыши. Клонируют ген неструктурного белка NS1 в плазмиду, предназначенную для экспрессии белков в клетках эукариот. Осуществляют сайт-направленный мутагенез 5'-концевого фрагмента вирусного гена с целью удаления стоп-кодона. Клонируют фрагмент гена орнитиндекарбоксилазы, кодирующего 53 С-концевые аминокислоты и содержащего на 5'-конце стоп-кодон. Нарабатывают плазмиды в клетках E.coli и производят последующую очистку в условиях пониженного содержания эндотоксинов. Осуществляют трансфекцию плазмидным препаратом культуры клеток эукариот с последующим иммуноблот-анализом синтеза химерного белка в клетках. Проводят иммунизацию мышей и анализ протективных свойств модифицированного препарата. Предложенное изобретение позволяет повысить эффективность ДНК-вакцинных препаратов как средств профилактики заболеваний клещевым энцефалитом. 5 ил.