Патент №2458130 - Рекомбинантная плазмидная днк pтв323, кодирующая гибридный полипептид gst-дельтамрт64 со свойствами видоспецифичного микобактериального антигена мрт64 (мрв64), рекомбинантный штамм бактерий escherichia coli - продуцент гибридного полипептида gst-дельтамрт64 и рекомбинантный полипептид gst-дельтамрт64

Рекомбинантная плазмидная ДНК рТВ323 по изобретению, кодирующая гибридный полипептид глутатион-S-трансфераза (GST) и укороченный вариант белка МРТ64 (r МРТ64), имеет среднюю м.м. 3,6 МДа, размер 5574 п.н., состоит из: а) EcoRI-BamHI-фрагмента векторной плазмиды pGEX-2T размером 4938 п.н., содержащего ген -лактамазы, индуцируемый tac-промотор, внутренний ген lacI q, кодирующий белок-репрессор лактозного оперона, фрагмент гена глутатион-S-трансферазы из S. japonicum с множественным сайтом для клонирования (МСК) генов в 3'-концевой части этого гена и нуклеотидной последовательностью, кодирующей сайт протеолиза тромбина и располагающейся перед МСК; б) EcoRI-BamHI-фрагмента размером 636 п.н., содержащего фланкированный сайтами для эндонуклеаз рестрикции EcoRI и BamHI укороченный ген МРТ64, полученный амплификацией соответствующего гену фрагмента с геномной ДНК М. tuberculosis; в) генетического маркера - ген -лактамазы, детерминирующий устойчивость трансформированных плазмидой рТВ323 клеток Е. coli к антибиотику ампициллину; г) уникальные сайты рестрикции: BamHI - 930/934, EcoRI - 1566/1570. Рекомбинантный штамм бактерий Escherichia coli BL21/pTB323 - продуцент гибридного полипептида GST- МРТ64 со свойствами микобактериального антигена МРТ64 депонированв Коллекции культур микроорганизмов ФГУН ГНЦ ВБ "Вектор" под № В-1028. Рекомбинантный полипептид GST- MPT64, продуцируемый рекомбинантным штаммом по изобретению, содержит в качестве белка-носителя N-концевой полипептидный фрагмент глутатион-S-трансферазы S.j. (226 а.о., 26,31 кДа) и имеет полную аминокислотную последовательность (431 а.о., 48,76 кДа), приведенную в описании. Использование изобретения позволяет нарабатывать высокоочищенный полипептид в препаративных количествах при сохранении иммуногенных свойств и возможности отделения целевого белка от аминокислотной последовательности белка-носителя для исследования иммуногенных свойств целевого белка. 3 н.п. ф-лы, 4 ил., 4 табл., 6 пр.

Патент №2458130, изображение 1
Патент №2458130, изображение 2
Патент №2458130, изображение 3

Классификация патента

Код Наименование
МПК C07K 14/195Пептиды, содержащие более 20 аминокислот; гастрины; соматостатины; меланотропины; их производные - из бактерий
МПК C07K 19/00Гибридные пептиды
МПК C12N 15/09Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев - метод рекомбинантных ДНК
МПК C12N 15/31Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев - гены, кодирующие микробные белки, например энтеротоксины
МПК C12N 15/70Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев - векторы или системы экспрессий, специально приспособленные для E.coli