Патент №2432401 - Способ получения безметионинового интерферона-альфа2b человека
Изобретение относится к микробиологической промышленности, медицинской биотехнологии и генной инженерии. Предложен новый способ получения безметионинового интерферона-альфа2b человека. Вначале конструируют рекомбинантные плазмидные ДНК, содержащие ген интерферона-альфа2b человека, перед которым расположен сайт протеолиза энтеропептидазой, и трансформируют ими клетки Escherichia coli. Культивируют клетки и выделяют тельца включения синтезированного предшественника. Затем осуществляют частичную ренатурацию выделенного предшественника в присутствии препятствующего замыканию дисульфидных связей дитиоэритриола. Проводят гидролиз предшественника ферментом энтеропептидазой с образованием безметионинового интерферона-альфа2b человека. После завершения реакции гидролиза предшественника проводят полную ренатурацию интерферона-альфа2b человека в присутствии способствующей замыканию дисульфидных связей пары соединений цистин и цистеин. Очистка полученного белка осуществляется методом хроматографии на КМ-сефарозе. 5 ил.
Классификация патента
| Код | Наименование |
|---|---|
| МПК C07K 14/56 | Пептиды, содержащие более 20 аминокислот; гастрины; соматостатины; меланотропины; их производные - альфа-интерферон |
| МПК C12N 1/21 | Микроорганизмы, например простейшие; их композиции; способы размножения, содержания или консервирования микроорганизмов или их композиций; способы приготовления или выделения композиций, содержащих микроорганизмы; питательные среды - модифицированные введением чужеродного генетического материала |
| МПК C12N 15/21 | Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев - альфа-интерферон |
| МПК C12N 15/70 | Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев - векторы или системы экспрессий, специально приспособленные для E.coli |
| МПК C12N 9/48 | Ферменты, например лигазы (6.); проферменты; композиции их; способы получения, активирования, ингибирования, разделения или очистки ферментов - действующие на пептидные связи, например тромбопластин, лейцин аминопептидаза (3.4) |
| МПК C12P 21/06 | Получение пептидов или протеинов - гидролизом пептидной связи, например белковых гидролизатовполучение пищевых продуктов гидролизом белка A 23J 3/00 |