Патент №2451086 - Способ детекции специфических нуклеотидных последовательностей и нуклеотидных замен с помощью пцр в режиме реального времени с эффектом гашения флуоресценции зонда праймером

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу детекции специфических нуклеотидных последовательностей и нуклеотидных замен с помощью ПЦР в режиме реального времени. Способ включает выделение нуклеиновых кислот из исследуемых образцов, подбор соответствующих олигонуклеотидных зондов и праймеров и проведение ПЦР-амплификации целевой нуклеиновой кислоты. Выполняют анализ кривых плавления зондов. При этом для амплификации целевой нуклеиновой кислоты используют соответствующую пару праймеров, один из которых, а именно реверсный, служит для образования цепи ДНК, комплементарной зонду, и содержит нефлуоресцирующий гаситель флуоресценции внутри нуклеотидной последовательности, ближе к 3' концу. А для детекции участка целевой нуклеиновой кислоты, находящегося между участками связывания праймеров, используют соответствующий 3'-флуоресцентно-меченый олигонуклеотидный зонд, участок связывания которого с одной стороны частично перекрывается с областью связывания немеченого форвардного праймера, а с другой стороны находится на расстоянии нескольких нуклеотидов от 3'-конца праймера, несущего гаситель флуоресценции. Предложенное изобретение позволяет повысить эффективность анализа специфических нуклеотидных последовательностей и нуклеотидных замен с помощью ПЦР в режиме реального времени. 11 з.п. ф-лы, 10 ил., 3 табл., 3 пр.