Патент №2412995 - Способ получения ингибитора коллагеназы с противоопухолевым действием из гепатопанкреаса камчатского краба

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при получении высокоочищенных и высокоактивных препаратов ингибиторов ферментов направленного действия, обладающих противоопухолевым действием. Способ предусматривает гомогенизацию сырья в 0,1 М ацетате аммония, содержащем 0,1-1 мМ ацетата кальция при рН 6,4-7,0. Полученный гомогенат центрифугируют с получением супернатанта. К полученному супернатанту добавляют сульфат аммония до 60-70%-ного насыщения. Отделяют осадок через 20 часов центрифугированием. Полученный осадок растворяют в дистиллированной воде с добавлением 0,1-1 мМ ацетата кальция до получения истинного раствора. Полученный раствор очищают и концентрируют на поливолоконной мембране с размером пор 100 кДа и двукратно промывают дистиллированной водой с последующим прогреванием концентрата до 60-100°С в течение 25 мин с получением осадка. Полученный осадок отделяют центрифугированием с получением суммарного препарата ингибитора в 0,05 М трисовом буфере с рН 7,0-8,0. Полученный суммарный препарат ингибитора хроматографируют на колонке с аффинным сорбентом - аргинин силохромом, с последующей элюцией активных ферментов трисовым буфером с добавлением 1 М NaCl и 20% изопропилового спирта. Фракцию, содержащую ингибитор, упаривают на роторном испарителе при 60-80°С в течение 40-60 мин и концентрируют ультрафильтрацией на мембране с размером пор 30-50 кДа с получением концентрата. Полученный концентрат, содержащий целевой продукт, промывают 0,01 М раствором хлористого натрия и лиофильно высушивают с получением целевого продукта. Изобретение позволяет расширить ассортимент препаратов, обладающих противоопухолевым действием. 5 табл., 2 ил.